抗体检测试剂盒的使用前准备工作别忘了!
在常见的实验中,抗体检测试剂盒测定过程为试剂准备工作,加样,洗涤,保温等正常的实验流程,一次好的准备工作可以使测定中试剂发挥大的作用,也可以因为一个小步骤而发生多种测定结果。那么在实际检测前,用户都需要做哪些准备工作呢?
1、加样
在
抗体检测试剂盒中一般有3次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在抗体检测试剂盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。 加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加入血清标本,然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。
2、试剂盒准备
按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。抗体检测试剂盒中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3、保温
在抗体检测试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育,有人称之为孵育,在抗体检测试剂盒中似不恰当。抗体检测试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。
4、洗涤
洗涤在抗体检测试剂盒过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。抗体检测试剂盒就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在抗体检测试剂盒操作中,洗涤是主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。洗涤的方式除某些抗体检测试剂盒仪器配有特殊的自动洗涤仪外,手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种。